文/华中农业大学 陈昌福，武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军
细菌耐药性问题，已经成为危及21世纪人类身体健康的严重威胁。我国与世界各国政府机构均在为遏制细菌的耐药性快速蔓延，制定各种管控措施与策略。我国卫生部联合国家多个部委机构，已经连续2次发布了遏制微生物耐药性的国家行动计划，我国的农业农村部也为遏制动物源性细菌耐药性问题发布了多次公告。
然而，现在细菌耐药性快速蔓延问题以及多重耐药性越来越严重的趋势并未得到缓解。尤其是在水产养殖业中，由于长期以来，人们事实上对抗微生物药物等“国标渔药”的存在滥用的问题，已经导致水产养殖动物致病性细菌产生了极强的耐药性。现在一旦水产养殖动物暴发细菌性疾病后，使用任何一种抗微生物药物的“国标渔药”，几乎都已经控制不止细菌性疾病的危害了。更为严峻的问题是，细菌产生的耐药因子（R+）是可以在各种细菌之间相互传递的，也就是说危害水产养殖动物致病菌产生的R+，也是可能将其耐药性传递给危害人类健康的致病性细菌，而导致危害人类健康的致病性细菌也产生相应的抗药性的。因此，如果控制不了水产养殖动物致病性细菌产生耐药性，仅仅控制危害人类健康的致病性细菌耐药性的产生与蔓延，也是难以完成好“遏制细菌耐药性的国家行动计划”的。要实现遏制水产养殖动物致病性细菌耐药性快速蔓延的趋势，必须有更多的人参与到这个工作中来。为此，我们在本文中提出了“中心实验室+采样实验室”的设想模式，目的是为了让监测致病性细菌耐药性变化的工作，更广泛地普及与推广，为遏制细菌耐药性快速蔓延问题，做出水产养殖人的努力，为实现“国家行动计划”做出一份实实在在的贡献！
在水产养殖业中药敏实验
为什么难以推广应用？
摘要：对水产养殖动物致病生物完成药敏实验检测，是实现对患病水产养殖动物科学、精准和减量用药的唯一途径和有效的“抓手”。多年来，我国农业农村部一再强调要加强对动物源性致病菌耐药性实施检测与防控工作，但是，至今收效甚微。本文内容对我国水产养殖业中推广致病性细菌药敏实验遭遇困难的现状进行了初步分析，并且对存在的部分困难提出了“中心实验室+采样实验室”的对策。旨在将这种有助于控制细菌耐药性发展的技术推广落实到实处，为我国的科学、精准和减量使用水产用兽药做出贡献。
关键词：水产养殖；国标渔药；药敏实验；抗微生物药物；杀虫剂由各种致病性细菌导致的细菌性病害，每年都给我国水产养殖动物造成严重的经济损失。从患病水产养殖动物体内完成病原菌分离、鉴定和药物敏感性实验，已成为水产养殖动物病害研究中的一项常规性工作内容。迄今为止世界各国对水生动物致病菌耐药性监测工作，已经建立了一套药敏实验标准化方法，如美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）、欧洲抗菌药物敏感试验委员会（EUCAST-ESCMID）等，已经颁布了一系列关于如何对致病性细菌完成药敏实验标准。
为了应对细菌耐药问题对21世纪的人类带来的挑战，遏制细菌耐药发展与蔓延，维护全人类的健康。我国国家卫生计生委联合国家发展改革委等部门，于2016年8月联合制定了《遏制细菌耐药国家行动计划（2016-2020年）》。经过几年的实施，发现一些常见病原菌耐药问题仍在不断加剧，我国面临的细菌耐药形势依然很严峻。于2022年10月，我国国家卫生计生委联合国家发展改革委等部门，于2022年10月，再次联合制定了《遏制微生物耐药国家行动计划（2022~2025）》。农业农村部为了响应《遏制微生物耐药国家行动计划（2022~2025）》，也提出了遏制动物源性细菌耐药性计划。从2015年开始，本文作者开始参加由全国水产技术推广总站具体实施的“水产养殖动物致病菌耐药性监测”工作，主要由各省的水产技术推广站作为具体实施单位。由于我国对水产养殖动物致病性细菌的药敏实验工作没有做好，直接导致农业农村部提出的科学、精准和减量用药的号召无法落到实处，广大的水产养殖业者也只能被迫盲目地使用一些“国标渔药”，直接导致了大量“国标渔药”不能有效治疗水产养殖动物疾病的现实问题。更为严峻的问题是，由于细菌产生的耐药因子（R+）是可以在不同种类的细菌间相互传递的，因此，在水产养殖中滥用药物，导致水生动物致病性细菌产生的耐药性，最终也会传递给危害人类的致病性细菌，而最终危害到人类的健康。在水产养殖业中药敏实验为什么难以推广应用？在这篇小文章中，我们试图从药敏实验操作技术层面，给与如下分析。1.规范的药敏实验技术标准复杂、操作人员难以掌握与正确判断结果对水生动物病原菌药敏实验标准方法，已经被众多国际相关机构高度关注。譬如在欧盟资助下成立的水生动物工作组，于1998年11月就起草了一份鱼类病原菌药敏实验标准参考方法，该方法虽然其主要内容参照了美国临床实验室标准化委员会（National committee for clinical laboratory，NCCLS）制定的M31-T（1997）的标准，但是，其中尚存在部分有待解决的问题，例如未规定质控菌株的质控限及敏感限等关键因子，仅对试验的操作方法作了规范。稍后，NCCLS在其兽医抗菌药物敏感试验委员会下设立了水产工作组（VAST-AWG），在Alderman等人的工作基础上，于2003年颁布了一份关于水产第一类型病原菌纸片琼脂扩散法敏感试验标准方法报告（M42-R），对质控菌株灭鲑气单胞菌Aeromonas salmonicida subsp.salmonicida（ATCC 33658）和大肠杆菌Escherichia coli（ATCC 25922）的质控限作了规范。但是，也未涉及到病原菌对不同药物的敏感限，对最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentrations，MIC）测定的标准方法NCCLS还在制订之中。日本动物抗菌药物协会（JSAA）M IC测定方法标准化委员会2003年依国际兽疫局（OIE）2000年关于动物病原菌耐药性和检测指导方案，及NCCLS动物病原菌药敏实验标准（M31-A2 2002），对1997年版的MIC测定标准做了修订，其中包括了部分危害养殖鱼类的病原菌。在我国的一些一线基层实验室，无法获得这些标准的质控菌株，对规范的药敏实验方法与技术的熟练掌握，客观尚存在着困难。
2.关于全国范围内推进药敏实验的设想：中心试验室+采样实验室我国是名副其实的水产养殖大国，要在全国范围内推进对水产养殖动物致病性细菌的药物敏感性实验检测技术，指导广大的水产养殖业者真正实现科学、精准和减量使用水产用兽药，就需要大量的实验室和操作人员参与。在短时间内，要让所有的实验室均能满足完成对致病性细菌药物敏感性检测的试验条件，配备熟悉药敏实验技术操作、准确判读药敏实验结果并根据药敏实验结果，指导水产养殖业者科学、精准地使用水产用兽药的药敏实验操作人员，的确是具有一定难度的。因此，为了确保对水产养殖动物致病性细菌药物敏感性检测结果的准确性，并能根据药敏实验结果，实施科学、精准地使用水产用兽药，我们设想在全国范围内设置“中心实验室+采样实验室”的模式，推进我国对水产养殖动物致病性细菌药敏实验技术的应用。
我们设想的具体做法是，动员全国范围内水产用兽药经销商，经过短时间技术培训，学会从患病水产养殖动物体内初分离致病性细菌的操作技术。将在超净工作台内解剖患病水产养殖动物，并分离致病性细菌接种在盛有培养基的平皿中后，直接将接种了致病性细菌的培养皿密封快递给就近的中心实验室，同时将该经销商销售的所有水产用国标兽药样品也一同寄往中心试验室，作为药敏试验的备选药物。中心实验室接收到来自采样实验室的培养皿后，首先检查培养皿是否受到污染，如果没有被污染的话，就从初分离培养皿中挑选单个菌落，实施纯分离并完成扩大培养分离菌株的工作。然后利用已经纯化的分离菌株完成对备选药物的药物敏感性实验，将获得的药敏实验结果及时地报告给采样实验室，直接指导水产养殖业者科学、精准地使用水产用兽药。经过一段时间后，由中心实验室整理来自全国采样实验室获得分离致病性细菌的药敏实验结果，探索我国水产养殖动物致病性细菌耐药性的变化状况并整理成实验报告，在有必要的前提下，提供给主管部门。我们认为只有利用“中心实验室+采样实验室”的这种模式，才有可能克服我国在推进水产养殖动物致病性细菌耐药性监测中的问题，达成利用监测到的水产养殖动物致病性细菌耐药性变化结果，指导广大水产养殖业者实现科学、精准使用水产用兽药的目标。“中心实验室+采样实验室”模式，不仅仅可以解决现阶段实验操作人员缺乏的问题，还能大幅减少实验室重复建设费用及实验耗材的后续处理难度，还能促进水产动保生产企业不断提高相关产品质量。本文版权属于南方农村报 、农财宝典 大国渔业，未经授权，谢绝转载。
作者：华中农业大学 陈昌福 武汉科研时代生物技术有限公司 周鑫军。
编辑：郑燕云
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